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慢病毒包裝

更新時間:2024-09-26

簡要描述:

慢病毒包裝在基因功能的研究過程中,通過使用慢病毒介導的方法能夠大大提高基因的轉導效率,達到目的基因高效表達的目的。

     慢病毒包裝在基因功能的研究過程中,通過使用慢病毒介導的方法能夠大大提高基因的轉導效率,達到目的基因高效表達的目的。慢病毒主要應用于shRNA、LncRNA、cDNA以及報告基因的研究。


慢病毒包裝具有以下特點:

1)適用于難轉染的細胞,如干細胞、原代細胞等,可很大程度的提高基因轉導效率。


2)慢病毒整合細胞基因組,可進行穩轉細胞株的篩選。


3)高純度的慢病毒可用于活體動物模型。


     慢病毒表達質粒包含了包裝、感染、穩定整合宿主細胞基因組所需的遺傳信息,包裝輔助質粒則提供了所有的轉錄、包裝和重組假病毒所需要的輔助蛋白。為產出高滴度的病毒顆粒,通常將表達質粒和包裝質粒共同轉染至包裝細胞中進行病毒的包裝。包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外培養液中。通過收集含病毒顆粒的上清,進行濃縮和純化可獲得高純度和高滴度的慢病毒。


慢病毒包裝實驗步驟

1、轉染前1天,將293T細胞接種于10 CM培養皿中,加入15 mL10FBSDMEM培養液,置37℃,5CO2培養至約70-80%融合時,進行細胞轉染。


2、轉染293T細胞

1)將慢病毒表達質粒和包裝質粒加入到Opti-MEM中,混勻。

2)將適量的Lipofectamine 2000 (invitrogen)加入到Opti-MEM中,混勻。

3)5分鐘后,將上述兩混合液混勻,室溫靜置20分種后,將混合液加入至培養皿中,前后左右晃動搖勻。置37℃,5%CO2培養箱中培養。


3、6小時后,換含10FBSDMEM培養液10mL。


4、轉染48小時后,收集病毒上清,500g離心10分鐘,0.45 μm濾器過濾。


5、濃縮純化后,分裝,-80℃保存。


     我們提供已測定好滴度,可以直接進行后續實驗的慢病毒液、實驗報告。質量保證,慢病毒液可用于感染目的細胞。活性滴度5×108 TU/ml。



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