Fish IF共染原位雜交原理：原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過(guò)程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。IF即免疫熒光，可檢測(cè)組織或細(xì)胞中某蛋白的表達(dá)情況及定位。

原位雜交(FISH、IF雙標(biāo))可以檢測(cè)靶基因與靶蛋白的共定位情況。

Fish IF共染實(shí)驗(yàn)步驟

1、組織固定：組織取出洗凈后立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12h。

2、脫水：組織固定完成后經(jīng)梯度酒精脫水后浸蠟，包埋。

3、切片：石蠟經(jīng)切片機(jī)切片，攤片機(jī)撈片，62°烤箱烤片2h。

4、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗。

5、消化：根據(jù)組織固定時(shí)間長(zhǎng)短，切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘，自然冷卻。后基因筆畫(huà)圈，根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20-30min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。

6、預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液，37°C孵育1h。

7、雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針雜交液,恒溫箱37度雜交過(guò)夜。

8、雜交后洗滌：洗去雜交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌。

9、孵育一抗：滴加一抗，PBS稀釋。4°過(guò)夜。后PBS洗3×5min。

10、孵育二抗：滴加相應(yīng)二抗，室溫孵育50min。后PBS洗3×5min。

11、DAPI復(fù)染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片。

12.鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長(zhǎng)330-380nm，發(fā)射波長(zhǎng)420nm,發(fā)藍(lán)光;FAM(488)綠光激發(fā)波長(zhǎng)465-495nm，發(fā)射波長(zhǎng)515-555 nm，發(fā)綠光;CY3紅光激發(fā)波長(zhǎng)510-560，發(fā)射波長(zhǎng)590nm，發(fā)紅光。)

送樣運(yùn)輸要求：

冰切。標(biāo)本放原位雜交固定液中，常溫運(yùn)輸;冰凍切片-20°運(yùn)輸。

石蠟。標(biāo)本放原位雜交固定液中，常溫運(yùn)輸;石蠟切片常溫運(yùn)輸。

細(xì)胞爬片。細(xì)胞爬片加原位雜交固定液固定15min后，密封，4度運(yùn)輸。共聚焦皿

新鮮組織：組織取出后可以立即冷凍處理，后干冰運(yùn)輸?shù)轿錆h進(jìn)行后續(xù)冰凍切片處理。新鮮組織-80°保存。

毓秀生物科技（上海）有限公司是一家專注于生物科技前沿技術(shù)研發(fā)和科研技術(shù)服務(wù)的公司，公司建有專業(yè)的分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、組織病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室，為眾多生物醫(yī)藥企業(yè)、科研機(jī)構(gòu)、醫(yī)院及高校提供分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、病理形態(tài)學(xué)等方面科研服務(wù)。公司核心團(tuán)隊(duì)曾在國(guó)內(nèi)外許多優(yōu)秀學(xué)府從事過(guò)多年研發(fā)工作，秉承“為客戶創(chuàng)造價(jià)值，為員工實(shí)現(xiàn)夢(mèng)想，為社會(huì)創(chuàng)造財(cái)富"的經(jīng)營(yíng)理念，堅(jiān)持以技術(shù)創(chuàng)新為先導(dǎo)，以服務(wù)質(zhì)量為根本，為中國(guó)生物醫(yī)藥和科學(xué)研究提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。